旋轉式細胞培養系統（The Rotary Cell Culture System，以下簡(jiǎn)稱(chēng)RCCS）是目前世界上培養貼壁和懸浮細胞的***新的裝置：RCCS中都能容易地進(jìn)行培養；RCCS中能實(shí)現模仿父系組織的結構和功能的已分化的三維物質(zhì)共同培養；
RCCS是***種重復性高、復雜的、三維的體外培養系統，用來(lái)仔細研究結構的變化，分離能控制正常組織分化和新生組織變形的生長(cháng)和調控分子。Johnson航天中心的Synthecon，該系統原先是為保護在宇航中所進(jìn)行的纖細的組織培養而設計的。然而，它的低剪切力、高的物質(zhì)傳遞效率和微重力的獨特環(huán)境，使我們在普通實(shí)驗室的組織培養箱內也能生長(cháng)出三維細胞組織。
Synthecon提供2種基本的RCCS容器：(CCCV)呈管狀，有***個(gè)中央氣體交換膜芯，它是為培養貼壁細胞所設計。(HARV)為盤(pán)狀的培養容器, 其內壁由氧交換膜所組成。它是為培養懸浮細胞所設計。然而，實(shí)踐證明，它也是***個(gè)理想的貼壁細胞的培養容器。
RCCS是水平旋轉的、無(wú)氣泡的膜擴散式氣體交換的培養系統。
相比普通系統來(lái)說(shuō)，新的RCCS的***個(gè)主要的優(yōu)勢是進(jìn)行能分化或模仿父系組織結構和功能的組織培養?？茖W(xué)***能得到和在人體內***樣的培養產(chǎn)物。這些細胞生長(cháng)后形成與其父系組織類(lèi)似的三維組織材料。因為破壞性的旋渦和碰撞力在水平的RCCS中是極小的，故這些生長(cháng)是可能的。這個(gè)非常低的剪切力的培養環(huán)境對于需要通過(guò)培養來(lái)生長(cháng)任何脆弱細胞類(lèi)型是同樣重要的。這些細胞類(lèi)型包括(當然并不局限于)：雜交瘤細胞、淋巴細胞、骨髓、巨噬細胞、T細胞，甚至植物的原生質(zhì)體和昆蟲(chóng)細胞。
Synthecon的RCCS使科學(xué)***能在普通的組織培養實(shí)驗室內生成非常復雜的、脆性的組織?？茖W(xué)***如果需要連續監測他們的細胞培養的話(huà)，能輕易地在很短的時(shí)間內進(jìn)行采樣而并不損傷所進(jìn)行的培養。加入細胞成分、化療成分、營(yíng)養成分、化學(xué)成分或試驗性的化妝品而導致細胞培養變化的結果可被嚴密地觀(guān)測。關(guān)于如何收集培養產(chǎn)物則是非常簡(jiǎn)單的，只要旋開(kāi)底蓋，倒出培養產(chǎn)物或用移液管吸。無(wú)須釋放劑或使用刮器。Synthecon發(fā)明的RCCS來(lái)培養了近百種不同類(lèi)型的細胞，包括人的正常的和惡變的細胞以及懸浮和貼壁細胞。例如，人的惡性黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌和惡性骨瘤的細胞株等。10%。然而，前列腺癌和乳腺癌組織在RCCS中就得到成功的培養。而且，這種組織培養的產(chǎn)物中不會(huì )含有干擾分析的鼠蛋白。
用中性（PH=7）洗滌劑：不要把容器的任何部件放在漂白的、酸性的或堿性的清洗溶液中。因清洗后容器中塑料和橡膠的部件中可能含有這些溶液中的有毒性化學(xué)物質(zhì)的殘留，會(huì )毒害細胞的生長(cháng)。泡在含氯化物的漂白液中肯定會(huì )帶來(lái)嚴重毒性問(wèn)題。
鉻酸鹽等腐蝕性的試劑會(huì )損壞金屬部件。研磨性的清潔劑或丙酮等強力的有機清潔復合物將使塑料部件受損并使之不能得到保修。
操作說(shuō)明中所提供的清洗方法對我們來(lái)說(shuō)已足夠了。氧交換膜特別易被損壞。清洗容器時(shí)應使用中性的實(shí)驗室清洗劑。手或軟刷使用起來(lái)應非常小心。***好用手指的軟表面輕刷。強度大的清潔劑和硬性的刷子會(huì )損傷塑料和橡膠部件。
盡量不要多玩弄整個(gè)裝置，好意的攙和***終會(huì )使許多培養產(chǎn)物夭折。
極扁的電源和通訊線(xiàn)能非常方便地通過(guò)培養箱的密封條而不會(huì )破壞培養箱的環(huán)境?？刂坪碗娫?**體單元能方便地放在培養箱的上面或旁邊，但絕對不能放在培養箱內。
該系統不是轉瓶培養裝置，所以不能按轉瓶的方法來(lái)操作。容器中的氣泡會(huì )產(chǎn)生旋渦并且使細胞致死。請按下面將要講的方法操作。對于在用注射器給容器抽真空時(shí)請不要用力過(guò)猛，否則會(huì )使氧交換膜破裂而不得不重新?lián)Q膜。
請不要過(guò)分擰緊螺栓和配件。過(guò)分的用力會(huì )在塑料部件上留下傷痕。
過(guò)分高的高壓蒸汽滅菌溫度會(huì )很快地老化塑料和橡膠部件，并且使加樣閥粘住。我們建議***合適的高壓蒸汽滅菌溫度為
臟的高壓蒸汽滅菌裝置中的有毒殘渣會(huì )滲透到氧交換膜、塑料和橡膠部件上，從而使容器帶毒。
我們建議在高壓蒸汽滅菌的前夜，容器中應注滿(mǎn)乙醇并且浸泡整夜。乙醇是極佳的無(wú)毒的去污染溶劑，它也會(huì )溶解和去除任何殘留的增塑劑。在排空后準備進(jìn)行高壓蒸汽滅菌之前，容器須用培養***的水來(lái)漂洗。
在高壓蒸汽滅菌的過(guò)程中，至少***個(gè)閥應被置于開(kāi)啟狀態(tài)，以防止內壓的產(chǎn)生。
在高壓蒸汽滅菌之前，圓柱型容器的中央螺帽須旋松***圈。
在高壓蒸汽滅菌之后須擰緊這些被松開(kāi)的螺帽。
過(guò)分地擰緊螺帽會(huì )在塑料部件上留下傷痕。
容器應作為***個(gè)整體進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，這樣可避免在組裝過(guò)程中的污染。
在接種前應使用培養液來(lái)漂洗容器。
由于培養液的配方隨細胞種類(lèi)和應用面的不同，沒(méi)有***個(gè)絕對現成的配方可供參考。***般來(lái)說(shuō)，在其它細胞培養設備中應用的很好的培養液的配方在
有濕度的組織培養箱可以減少通過(guò)硅橡膠氧交換膜的培養液的流失。這對于
有關(guān)特定的細胞培養技術(shù)請參見(jiàn)所附的參考資料。
注射器只有帶旋鎖轉換接頭后才可使用。因震動(dòng)和回旋力會(huì )使無(wú)旋鎖的注射器掉落，以致注射器接頭的開(kāi)口外露，使培養液的外溢從而導致污染。
氣泡會(huì )產(chǎn)生旋渦使細胞致死。盡管可能只有小氣泡會(huì )產(chǎn)生，***旦被發(fā)現就應立即用注射器來(lái)抽除，我們應當至少每天應檢查***次。
為了使細胞在培養容器中得到均勻分布，旋轉基座須水平放穩。這對圓柱型細胞培養容器
RCCS來(lái)說(shuō)，合適的消毒技術(shù)可能是唯***可沿用的轉瓶操作準則。105到110℃, 周期為30分鐘。這被證明是足夠的，如果還擔心滅菌不夠的話(huà)，我們建議您應當重新再進(jìn)行***遍滅菌，而不能升高溫度。HARV的周邊螺帽在高壓蒸汽滅菌之前也須旋松***圈。RCCS中能同樣很好地應用。這些培養液能提供***個(gè)好的開(kāi)端來(lái)開(kāi)發(fā)特殊的配方以迎合特殊的應用。我們的參考資料提供了已成功應用于RCCS的好幾個(gè)培養液配方的信息。10ml的HARV特別重要。(CCCV)尤其重要。
15到20RPM作為啟動(dòng)速度對于在微載體珠粒上的貼壁細胞來(lái)說(shuō)是較為合適的。為了補償培養物的沉降速率，轉速必須進(jìn)行調整?？梢?jiàn)的細胞團在容器內形成***個(gè)流體軌道并且不與容器壁或中間的膜芯相碰。10RPM這個(gè)極低的轉率時(shí)能極容易地懸浮。24小時(shí)內會(huì )完全貼附于微載體。如旋轉停下來(lái)了，則氧交換會(huì )停止，細胞就會(huì )死亡。要得到好的有代表性的樣本，在取樣時(shí)容器不能停轉。在實(shí)踐中，我們常常在容器旋轉的過(guò)程中用注射器來(lái)取樣。
淋巴細胞等懸浮細胞在如***開(kāi)始用極小的分生組織碎塊來(lái)進(jìn)行培養的話(huà)，微載體珠?？赡懿⒉恍枰?。
當容器旋轉時(shí)，細胞會(huì )馬上貼附在微載體上。不必要也不主張在貼附階段使正在旋轉中的容器停下來(lái)。細胞***般在 我們可研究細胞從正常生長(cháng)，通過(guò)畸形生長(cháng)和發(fā)育不良演變到腫瘤，這個(gè)細胞由正常生長(cháng)到惡變的全過(guò)程。癌癥治療機構由此能進(jìn)行化療藥物的篩選試驗。愛(ài)滋和其它病毒的研究者從而可得到源源不斷的人的骨髓和其它能感染、研究和希望用來(lái)生成疫苗的寄主細胞。
科學(xué)***已成功地用這個(gè)美***宇航局的至今所有在RCCS中培養的細胞都獲得成功。在***個(gè)經(jīng)常做的試驗中，正常人的纖維細胞與人的結腸癌細胞共同培養。在不到***個(gè)月內，培養出數百種已分化的結腸癌的息肉，其密度為每直徑為1cm的園中有***塊。共有5個(gè)被分化的細胞類(lèi)型被檢測出，其中包括粘蛋白分泌性杯狀細胞。在另外的試驗中，惡性黑色素瘤和惡性黑色素細胞能連續生長(cháng)100天以上。
眾所周知，大多數人類(lèi)的腫瘤是很難用其它方法在實(shí)驗室中生長(cháng)的，盡管人的癌細胞能被種植到免疫力缺乏的鼠上，但前列腺癌、乳腺癌在鼠上的傳遞率只有不到培養液、細胞和細胞團粒在容器內旋轉，它們不與容器壁或任何其它易致傷的物體相碰。因該系統無(wú)推進(jìn)器、空氣升液器、氣泡或攪拌器，故幾乎沒(méi)有破壞性的剪切力，使得大細胞團得以形成。
懸浮細胞和微載體珠粒上的貼壁細胞在水平的旋轉式細胞培養容器內產(chǎn)生***個(gè)均勻的、極低剪切力的液體懸浮軌道。隨著(zhù)細胞的長(cháng)大，可調節旋轉的速度來(lái)抵償沉降速率。
正常的、新生的、單個(gè)的以及共同培養的脆的、人的、貼壁和懸浮細胞在體外得以生長(cháng)。
圓柱型容器
高截面縱橫比容器發(fā)明于它使研究者能對各種細胞進(jìn)行高密度的培養；
凡用其它方法不能輕易地培養的細胞組織
滬公網(wǎng)安備31011502016460號
