ELISA vs WB，怎么選？牢記這幾點(diǎn)
蛋白質(zhì)分析和鑒定方法***常用的就是ELISA和Western Blot（以下簡(jiǎn)稱(chēng)WB），那到底該選哪種呢？
ELISA簡(jiǎn)單，還是WB簡(jiǎn)單？
是不是二選***就可以了？
ELISA和WB都是基于抗原-抗體特異性結合的原理，主要區別在于： ELISA對于抗原、抗體都能檢測 WB則主要檢測抗原 此外，了解這兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)，即可輕而易舉地解決如何選擇的問(wèn)題。 ELISA 靈敏度高、應用領(lǐng)域廣泛，檢測樣本濃度可低至pg/ml，操作相對簡(jiǎn)單，用于確定樣品中是否存在蛋白質(zhì)的高效方法，亦可精確定量蛋白質(zhì)的濃度。 ELISA 具有包被、封閉、檢測、 結果讀取4個(gè)常規操作步驟，有直接、間接、夾心及競爭檢測4種主要類(lèi)型。 ELISA直接、間接、夾心檢測示例 ELISA標準曲線(xiàn)示例 ELISA的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)：適合體液(血清、尿液等)、細胞上清樣本；靈敏度高，操作簡(jiǎn)單、高效、快速（1-2h），需樣品量較少，可以同時(shí)進(jìn)行多個(gè)樣本分析。另外，也可靈活地DIY 檢測試劑盒，即可降低成本，又解決了實(shí)驗需求；同時(shí)ELISA可搭配實(shí)驗室高通量或自動(dòng)化設備，實(shí)現自動(dòng)化操作。 缺點(diǎn)：實(shí)驗操作過(guò)程中，由于操作問(wèn)題、樣品污染、使用低質(zhì)量試劑等原因，其特異性方面經(jīng)常受到影響，可能會(huì )產(chǎn)生假陽(yáng)性或假陰性結果；此外試劑盒中的抗體組分須低溫運輸、儲存；ELISA無(wú)法提供有關(guān)目標蛋白的質(zhì)量和豐度等其他信息。 Western Blot 是***種通過(guò)電泳、轉膜、抗體孵育、成像等步驟對目標蛋白進(jìn)行檢測的方法，操作流程相對復雜，用于識別和了解蛋白質(zhì)的***些特征元素、蛋白質(zhì)相互作用和修飾等，可提供目標蛋白的詳細信息，如蛋白質(zhì)大小和豐度等，也常被用于ELISA和其他檢測方法結果的驗證，它可以有效地幫助排除假陽(yáng)性或假陰性的結果。 Western Blot的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)：適用于組織或細胞裂解液樣本；檢測結果簡(jiǎn)單易懂；特異性高，能夠從多種蛋白質(zhì)中識別目標蛋白；可提供目標蛋白的分子量、表達豐度等信息；熒光Western Blot，可以在***個(gè)實(shí)驗中進(jìn)行多重檢測，檢測多種蛋白質(zhì)。 缺點(diǎn)：傳統操作步驟繁瑣、耗時(shí)（1到2天），體系如果沒(méi)有優(yōu)化，容易出現信號衰減快、高背景等情況，導致不理想的檢測結果；同時(shí)檢測靶蛋白的數量受限于***抗和二抗的組合；通常被用作驗證方法。 使用iBright 成像系統捕獲的熒光Western Blot圖像示例 那到底怎么選呢，ELISA or Western Blot？ 若實(shí)驗目的是需要簡(jiǎn)單、快速地確定蛋白質(zhì)是否存在，并需要得到精確濃度，ELISA是更好的選擇。 若實(shí)驗目的是需要得到更多關(guān)于蛋白質(zhì)的信息，比如分子量、純度、蛋白質(zhì)間相互作用、蛋白質(zhì)表達變化或翻譯后修飾等，則Western Blot更適合。 此外，Western Blot和ELISA檢測的結果也可相互印證。
(文章來(lái)源于儀器網(wǎng))
