你知道核酸提取儀的分類(lèi)及原理嗎?
核酸是生命的***基本物質(zhì)之***,可分為DNA和RNA兩類(lèi),廣泛存在于動(dòng)物、植物細胞、微生物等所有生命體內。核酸提取包括DNA提取,RNA提取,質(zhì)粒提取。核酸是遺傳信息的攜帶者,是基因表達的物質(zhì)基礎,是分子生物學(xué)研究的主要對象。無(wú)論是進(jìn)行核酸的結構還是功能研究,***先都需要對核酸進(jìn)行提取和純化。
核酸提取儀就是應用配套的核酸提取試劑來(lái)自動(dòng)完成樣本核酸提取工作的儀器。廣泛應用于疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、
法醫學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業(yè)和分子生物學(xué)研究等眾多領(lǐng)域。
根據儀器型號大小不同,核酸提取儀可劃分為自動(dòng)液體工作站和小型自動(dòng)核酸提取儀:
(1)自動(dòng)液體工作站是功能非常強大的設備,提取核酸只是其功能的***個(gè)應用,但因為設備成本高昂,運行成本高,適合***次提取幾千個(gè)同***種類(lèi)標本,不太適合常規實(shí)驗室提取核酸,所以真正得到應用的比較少。
(2)小型的自動(dòng)化儀器是通過(guò)運行結構的特殊性來(lái)達到自動(dòng)提取核酸的目的,儀器設備和運行成本低,操作方便,可以在任何實(shí)驗室使用,因而得到越來(lái)越多的應用。
根據提取原理不同,核酸提取儀可劃分為采用離心柱法的核酸提取儀和采用磁珠法的核酸提取儀:
(1)離心柱法核酸提取儀主要采用離心機和自動(dòng)移液裝置相結合的方法,操作時(shí)間和手工提取差不多,但實(shí)際工作效率并沒(méi)有提高,且樣本需求量大,損失多,成本昂貴,不同型號儀器的耗材也不能通用,僅適合經(jīng)費充足的大型實(shí)驗室使用。
(2)磁珠法以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸,在低鹽高PH值下與核酸分離的原理,再通過(guò)移動(dòng)磁珠或轉移液體來(lái)實(shí)現核酸的整個(gè)提取純化過(guò)程。其操作簡(jiǎn)單快捷,大大提高實(shí)驗效率,且成本低廉,因而可以在不同實(shí)驗室使用,是目前市場(chǎng)上的主流儀器。
其中,磁珠法核酸提取儀又分為磁棒法和抽吸法兩種類(lèi)別:
(1)抽吸法就是通過(guò)自動(dòng)移液裝置來(lái)進(jìn)行,通過(guò)自動(dòng)移液裝置來(lái)加入裂解液、磁珠吸附;再抽走裂解液,加入漂洗液,磁珠吸附;***后抽走漂洗液,加入洗脫緩沖液。但是抽吸法***大的問(wèn)題在于,為了在去除廢液的時(shí)候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠連同廢液被抽掉,這樣每***次抽廢液的時(shí)候總有***小部分不能徹底的抽走,特別是磁鐵在底部的裝置,因為磁珠被磁鐵吸附在底部,所以移液器不能靠底部太近。
(2)磁棒法通量通常有8、16、32、96通道,相對于抽吸法,磁棒法的優(yōu)點(diǎn)是每***步的液體不殘留,因為磁棒只帶走磁珠,轉移到下***個(gè)步驟相應的反應孔中。如果選擇磁棒法的提取儀器***好要功能更齊全的,比如可以加熱,每個(gè)加熱槽***好獨立溫控,這樣可以設置加熱、裂解、洗脫的不同溫度。另外,帶動(dòng)磁棒的電機要能帶動(dòng)磁棒進(jìn)行液體的快速混勻和攪拌,這樣才有利于自動(dòng)化和有助于裂解和漂洗徹底。
磁珠法是目前市場(chǎng)上的主流核酸提取儀器,磁珠法核酸提取是納米科技與生物技術(shù)的完美結合,具有其它DNA提取方法不可比擬的優(yōu)勢:
1.樣本需求量低:微量的材料即可提到高濃度的核酸;
2.操作簡(jiǎn)單快速:整個(gè)操作流程基本分為五步(裂解、結合、洗滌、干燥、洗脫),全程無(wú)需離心操作,大多可在30~60分鐘內完成;
3.質(zhì)量穩定可靠:游離的磁珠與核酸的結合量更大,特異性的結合使得核酸純度更高,且可通過(guò)控制磁珠表面基團來(lái)調節核酸回收量;
4.全自動(dòng)化操作:采用核酸提取儀可實(shí)現自動(dòng)化、高通量操作,***鍵啟動(dòng),即可實(shí)現幾十甚至幾百個(gè)樣品的提??;
5.安全無(wú)毒無(wú)害:試劑不含酚、氯仿等有毒化學(xué)試劑,完全符合現代化環(huán)保理念。
總的來(lái)說(shuō),我們選擇核酸提取儀時(shí)不***定越貴越好,也不***定非要某種牌子的,只要是產(chǎn)品屬性契合自己試驗要求和條件的,那就是合適的核酸提取儀。