GB 5009.35-2023 《食品安全******標準 食品中合成著(zhù)色劑的測定》實(shí)施以來(lái)，推出了Copure? PWAX混合型弱陰離子交換柱專(zhuān)用柱，為廣大客戶(hù)解決了在著(zhù)色劑檢測上遇到的問(wèn)題，備受客戶(hù)好評。
根據老師反饋，在測試茶葉中的合成著(zhù)色劑時(shí)，采用GB 5009.35-2023的方法測試時(shí)，容易出現堵柱子，回收率不好的情況等，鑒于此，采用Copure? PWAX混合型弱陰離子交換柱專(zhuān)用柱和CommaSil? C18色譜柱開(kāi)發(fā)了茶葉基質(zhì)中的合成著(zhù)色劑的測試方法。

1.1樣品提取
取1.0 g（精確至0.001 g）樣品于50 mL離心管中，加入25 mL50%乙醇水溶液，渦旋20min，10000rpm離心2 min，將上清液轉移至50 mL離心管中，再加入10mL 50%乙醇水溶液重復提取兩次，離心。合并三次提取液，用50%乙醇水溶液定容至50 mL，8000rpm離心5 min，準確移取10 mL上清液于另***50 mL離心管中，加入2 mL甲酸，混勻，待凈化。
1.2試樣的凈化濃縮
先依次用6 mL甲醇和6 mL10%甲酸水活化Copure? PWAX混合型弱陰離子交換柱專(zhuān)用柱（貨號：COPWAX6150,150 mg/6 mL,），流出液棄去。保持柱體濕潤，將待凈化液注入柱中，控制流出液流速在1滴/秒，棄去流出液。再依次用6 mL水和6 mL甲醇淋洗，棄去淋洗液，抽干小柱。***后用6 mL 15%氨化甲醇洗脫，收集洗脫液于15 mL離心管中，于50 ℃下氮吹至近干（200μL左右）。用20mM乙酸銨-甲醇溶液(9:1，pH=9.0)定容至1 mL，渦旋5min，超聲溶解5min（保證充分溶解），10000rpm離心5min，過(guò)親水PTFE濾膜，上機分析。

1.3空白實(shí)驗
1.3.1過(guò)程空白

取***支潔凈的50 mL具塞離心管，不稱(chēng)取試樣，按照上述1.1和1.2進(jìn)行提取、凈化，濃縮，過(guò)膜上機測試。
1.3.2空白本底實(shí)驗
稱(chēng)取試樣1 g（精確至0.001 g）按照上述1.1和1.2進(jìn)行提取、凈化，濃縮，過(guò)膜上機測試。

分別精密移取11種著(zhù)色劑混標中間液（100μg/mL）0.02 mL、0.05mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL于10 mL容量瓶中，用水定容至刻線(xiàn)，搖勻，得標準系列工作液。濃度分別為0.20 μg/mL、0.50 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL。

儀器：ThermoFisher U3000液相色譜儀
色譜柱：CommaSil? (4.6 mm×250 mm，5 μm)
流動(dòng)相：A：20 mmol/L乙酸銨溶液 B：甲醇
洗脫方式：梯度洗脫，見(jiàn)表1
流速：1 mL/min
柱溫：30 ℃
進(jìn)樣量：10 μL
檢測器：紫外檢測器
檢測波長(cháng)：415 nm、520 nm、610 nm

表1 梯度洗脫程序

4.1 加標回收

表2 紅茶中11種合成著(zhù)色劑加標回收率

圖1 11種合成著(zhù)色劑標準溶液（10μg/mL）液相色譜圖

圖2 紅茶本底液相色譜圖

圖3 加標濃度為1.5mg/kg時(shí)紅茶中11種合成著(zhù)色劑液相色譜圖

圖4 加標濃度為4.5mg/kg時(shí)紅茶中11種合成著(zhù)色劑液相色譜圖

圖5 加標濃度為15 mg/kg時(shí)紅茶中11種合成著(zhù)色劑液相色譜圖

注意事項：
1.靛藍標準溶液臨用現配。
2.提取次數參考***標，少量多次原則，濃度過(guò)大，需要增加提取次數。
3.過(guò)柱時(shí)，保持柱體濕潤，流速不宜過(guò)快，控制在1滴/秒。
4.50℃氮氣濃縮至近干，過(guò)干容易損失目標物，復溶時(shí)不易完全溶解。
5.上機之前過(guò)濾所用的濾膜不得使用尼龍濾膜，因為尼龍的化學(xué)成分是聚酰胺，會(huì )吸附合成著(zhù)色劑，要用親水PTFE。
6.過(guò)濾膜前離心樣液，有助于過(guò)膜，避免過(guò)濾時(shí)出現堵的現象。