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【液體吸光度測量】典型配置、硬件說(shuō)明、軟件操作

2024-05-07 09:35:55

從紫外到近紅外再到更長(cháng)的波長(cháng),吸光度測量提供了有關(guān)物質(zhì)在所有狀態(tài)下的化學(xué)成分的有價(jià)值的信息。

吸光度測量?jì)?yōu)勢:

  • 無(wú)損測量-除非你的樣品是光敏的,否則測量可以在不改變樣品的情況下重復進(jìn)行。

  • 定量結果-用吸光度測定溶液濃度。

  • 準確性和重復性-使用適當的工具和方法,吸光度可以被量化,具有很高的測量到測量的精度。

表1 典型系統配置▼

紫外/可見(jiàn)光波段
近紅外波段

光譜儀

Flame 系列,HR/Maya 系列,QE Pro
NIRQUEST,Flame-S-VIS-NIR
軟件
Oceanview 1.6.3
光源
HL-2000 系列

采樣部件

比色皿
石英比色皿CV-Q-10,***次性比色皿CVD-UV 或CVD-VIS

比色皿支架

CUV-UV,CUV-UV-10, CUV-VAR ,CUV-FL-DA

光纖
QP400-2-VIS-NIR,QP600-2-VIS-NIR

【HL -2000 光源介紹】

HL-2000 鹵鎢光源是***種多用途光源,使用范圍VIS-NIR (360 nm-2000 nm)。該光源內置致冷風(fēng)扇,可以保證光源的穩定性。HL-2000 鹵鎢光源配有內嵌濾光片支架,支架的尺寸為25.4 mm2 或50.8 mm2,厚度為3mm。其中,HL-2000-FHSA 型號有手動(dòng)和TTL 快門(mén), 用來(lái)控制光源的強弱。

光源的基本操作步驟:

  • 啟動(dòng)光源,預熱 10 分鐘,以達到穩定狀態(tài);

  • 光纖與光源連接后,可通過(guò)轉動(dòng)調節光闌旋鈕控制光強;

  • 如果用戶(hù)在實(shí)驗操作中對光源的輸出光譜有特殊要求,可在插片凹槽處放置濾光片、衰減片等光學(xué)器件。


圖2 HL-2000-FHSA 光源實(shí)物圖

【比色皿介紹】 
海洋光學(xué)提供用于吸光度、透射率和熒光測量的各類(lèi)比色皿。其中,石英比色皿適用于170-2700nm 的范圍,與酸性溶液的兼容性好,并且可以牢固的固定在支架上。經(jīng)過(guò)適當的護理和保養,石英比色皿在無(wú)劃痕、裂紋和類(lèi)似缺陷的情況下,可進(jìn)行有效再利用。同 時(shí),海洋光學(xué)也提供***次性比色皿,例如塑料材質(zhì)的CVD-UV 和 CVD-VIS。CVD-UV 比色皿的適用范圍為 220-900nm,而 CVD-VIS 比色皿的適用范圍為 350-900nm。這兩種型號的比色皿光程長(cháng) 1cm。***次性比色皿不能二次使用,以避免交叉污染的風(fēng)險 。***次性比色皿具有較高的化學(xué)穩定性,強酸和強堿環(huán)境都適用。

圖 3 ***次性比色皿

圖4 石英比色皿

【比色皿支架介紹】
CUV-UV 比色皿支架適用于 1cm 光程的比色皿,用于溶液的絕對吸光度測量。CUV-UV-10 比色皿支架適用于10cm 光程的比色皿,用于溶液和氣體的絕對吸光度的測量。這兩種比色皿支架均配置有兩個(gè)可調準直透鏡,1/4"濾光片插槽和連通恒溫水源的內置管道(采用對流方式加熱或冷卻底座和比色皿),都可以通過(guò)SMA 接頭的光纖分別連接光譜儀和光源。

圖 5 CUV-UV 比色皿支架

圖 6 CUV-UV-10 比色皿支架

CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架適用于 1cm 光程的比色皿, 配有四個(gè)石英準直透鏡,每個(gè)準直透鏡上配備SMA 光纖連接器;支架內置濾光片狹縫,可在熒光測量中使用濾光片;此外,比色皿支架的底部有連通恒溫水源的內置管道。當與海洋光學(xué)的光譜儀和光源配套使用時(shí),CUV-ALL-UV 4-WAY 能夠用于吸光度、熒光、散射等光學(xué)性能的測量。

此外,海洋光學(xué)還提供 CUV-VAR 型可變光程的比色皿架,可調節光程范圍為 1-10cm, 內置的準直鏡固定在支架上,支架可在基座上滑動(dòng),CUV-VAR 適用于需改變光程的液體的吸光度測量。

圖7 CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架

圖8 CUV-FL-DA 直連比色皿支架

圖9 CUV-VAR 可變光程比色皿架

圖10 CUV-QPOD 可控溫比色皿支架

下面我們以CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架為例,介紹比色皿支架的使用方法。
  • 將比色皿放置在CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架的夾具中,支架內配有可調彈簧活塞,用來(lái)固定比色皿。比色皿支架有***個(gè)內置的濾光片插槽,我們將連接光源的光纖引入靠近插槽***側的連接口??蓪V光片放置于插槽中,進(jìn)行吸光度測量。
  • 兩根光纖連接比色皿支架時(shí),若兩端呈現 90°,則用于測量樣品的熒光;若兩端呈 180°,則用于測量樣品的吸光度??筛鶕唧w要求連接光纖與比色皿支架。
  • 比色皿支架的底部有隱藏管道,可連接外部水源,以控制比色皿內樣品溫度。如下面實(shí)物圖所示,支架底座可見(jiàn) 3 個(gè)出/入水口,出/入水口前的白色旋鈕可拆卸,使用時(shí)請根據需求卸下。將通道口連接附件,附件的另***側連接水管,用戶(hù)可選擇兩進(jìn)***出或兩出***進(jìn)模式。需要注意的是,用戶(hù)需要將將出水口管道***側接入水泵。

圖11 CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架實(shí)物圖

圖12 連接附件


02

硬件說(shuō)明


搭建液體吸光度測量系統,具體操作步驟如下:

1)使用***根光纖連接比色皿支架與光譜儀,另***根光纖連接比色皿支架與光源,注意兩端光纖呈 180°(如圖14 所示);

2) 通過(guò)USB 數據線(xiàn)連接光譜儀至PC 端;

3)用電源線(xiàn)連接光源和市電插座(注意選擇帶地線(xiàn)的***標電源線(xiàn)和市電插座);

4) 打開(kāi)光源,預熱***段時(shí)間后,在空比色皿中裝入純水,測量參考光譜;

5)切斷光路(此處不建議直接關(guān)閉光源,可通過(guò)遮擋光源來(lái)切斷光路),測量背景光譜;

6)恢復光路,將樣品裝入空比色皿,進(jìn)行樣品的吸光度測量。

圖13 裝有樣品的比色皿

圖 14 CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架


圖15 遮光罩

圖 16 液體吸光度測量系統實(shí)物圖

圖17 Flame 光譜儀接口說(shuō)明

注意:吸光度測量時(shí),遮光罩應始終放置在樣品上方,排除環(huán)境光的干擾。


03

軟件操作


本部分介紹吸光度測量的軟件操作流程,具體操作步驟如下:

1)從歡迎界面或者點(diǎn)擊圖標創(chuàng )建新的光譜應用,在光譜應用向導中點(diǎn)擊吸光度向導圖標。

2)出現“選擇濃度模型”窗口,點(diǎn)擊“僅吸光度”選項,其他兩項見(jiàn)文檔***后的補充介紹。

  • 僅吸光度:測量液體或氣體樣品的吸光度。

  • 朗伯比爾定律:適用于測量未知濃度的樣品,在吸光度測量的基礎上,輸入樣品的消光系數和光程,利用朗伯比爾定律 ???? = ????cl,得到樣品的濃度。 

  • 從已知濃度的溶液校準:如果用戶(hù)已經(jīng)測得樣品在幾組不同濃度情況下的吸光度,輸入吸光度與濃度的數據后,軟件可將數據點(diǎn)進(jìn)行曲線(xiàn)擬合。當用戶(hù)再次測量未知濃度的同***樣品時(shí),軟件將根據樣品的吸光度和前期數據擬合 的曲線(xiàn),計算得到樣品的濃度。

3)調整好硬件配置后,在軟件中設置數據采集參數,包括積分時(shí)間(integration time)、平均次數(average)和滑動(dòng)平均(boxcar)。用戶(hù)可根據光源的強度,調節積分時(shí)間和平均次數等參數,勾選 “暗噪聲校準”和“非線(xiàn)性校準”功能。注意參考 譜測量和樣品測量時(shí)的參數設置應相同。設置完成,光譜將顯示在右側譜圖界 面,點(diǎn)擊“下***步”按鈕。 

各個(gè)參數詳細含義請參考軟件手冊或help菜單?;蛘邚椭拼蜷_(kāi)下面鏈接: 
http://www.oceanoptics.cn/spectroscopy_glossary
下面是簡(jiǎn)單介紹:
  • 積分時(shí)間:積分時(shí)間是檢測器在將累積的電荷通過(guò)A/D轉換器加工之前,被允許收集光子的時(shí)間長(cháng)度。***小積分時(shí)間是設備支持的***短積分時(shí)間,它取決于檢測器讀出所有像素信息的快慢,積分時(shí)間 與數據傳輸速度是不同的概念。

  • 平均次數:光譜被顯示到軟件里之前會(huì )采集多次,然后取平均。

  • 滑動(dòng)平均:平滑是***種可以應用于光譜的空間平均。該過(guò)程通過(guò)平均相鄰像素點(diǎn)的值來(lái)消除噪聲,因此它會(huì )以犧牲光學(xué)分辨率為代價(jià)來(lái)提高信噪比??臻g平均在光譜相對平坦以及相近像元變化較小的情 況下使用是非常有效的,但由此產(chǎn)生是分辨率的損失會(huì )使得尖銳的光譜特征峰難以分辨。當應用空間 平均時(shí),信噪比會(huì )以像元平均的平方根為基數進(jìn)行提高。請注意,在海洋光學(xué)軟件中,平滑寬度的值 是指所有像元以中間為基準靠左或靠右的像元和的平均數。平滑值是4實(shí)際上是將9個(gè)像元***起平均(4個(gè)靠左像元+1個(gè)中心像元+4個(gè)靠右像元),信噪比將以3為倍數增加。同樣的,平滑值是2(5個(gè) 像元)將使信噪比以2.2為倍數增加,平滑值是0(1個(gè)像元),信噪比以1為倍數增加(因此光譜不改 變)。

  • 暗噪聲校準:海洋光學(xué)的大部分光譜儀都有自帶的遮光像元。暗噪聲校準會(huì )用當前光譜讀數減去遮光 像元的讀書(shū),以排除溫飄等系統性影響。

  • 非線(xiàn)性校準:光譜儀出廠(chǎng)前已完成。如無(wú)特殊需求,請默認勾選。

  • 觸發(fā)模式:請參考海洋網(wǎng)站的相關(guān)文檔。如無(wú)特殊需求,可保持默認設置不變。 

4)出現“保存參考光譜”窗口,點(diǎn)擊圖標保存參考光譜,再點(diǎn)擊“下***步”。

5)出現“保存背景光譜”窗口,點(diǎn)擊圖標按鈕,保存背景光譜。之后點(diǎn)擊“完成”按鈕完成設置。

6)在視圖窗口中,吸光度測量結果以?xún)蓮垐D譜的形式顯示。如下圖所示,左側為吸光度圖譜,右側為光譜全譜,圖譜結果均實(shí)時(shí)更新。點(diǎn)擊 “以表格形式查看 結果”,即可查看圖譜的數據表,表中的數據可復制后粘貼到Excel 或 txt。

a) 暫停采譜,保存此時(shí)的光譜數據。OceanView 界面左上方工具欄中有運行、單步采集以及暫停采集的快捷鍵。  

 : 單步采集光譜數據,單次采集后停止,點(diǎn)擊運行,可繼續采集。

(來(lái)源: