【液體吸光度測量】典型配置、硬件說(shuō)明、軟件操作
從紫外到近紅外再到更長(cháng)的波長(cháng),吸光度測量提供了有關(guān)物質(zhì)在所有狀態(tài)下的化學(xué)成分的有價(jià)值的信息。
吸光度測量?jì)?yōu)勢: 無(wú)損測量-除非你的樣品是光敏的,否則測量可以在不改變樣品的情況下重復進(jìn)行。 定量結果-用吸光度測定溶液濃度。 準確性和重復性-使用適當的工具和方法,吸光度可以被量化,具有很高的測量到測量的精度。 【HL -2000 光源介紹】 光源的基本操作步驟: 啟動(dòng)光源,預熱 10 分鐘,以達到穩定狀態(tài); 光纖與光源連接后,可通過(guò)轉動(dòng)調節光闌旋鈕控制光強; 如果用戶(hù)在實(shí)驗操作中對光源的輸出光譜有特殊要求,可在插片凹槽處放置濾光片、衰減片等光學(xué)器件。 圖2 HL-2000-FHSA 光源實(shí)物圖 圖 3 ***次性比色皿 圖4 石英比色皿 圖 5 CUV-UV 比色皿支架 圖 6 CUV-UV-10 比色皿支架 此外,海洋光學(xué)還提供 CUV-VAR 型可變光程的比色皿架,可調節光程范圍為 1-10cm, 內置的準直鏡固定在支架上,支架可在基座上滑動(dòng),CUV-VAR 適用于需改變光程的液體的吸光度測量。 圖7 CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架 圖8 CUV-FL-DA 直連比色皿支架 圖9 CUV-VAR 可變光程比色皿架 圖10 CUV-QPOD 可控溫比色皿支架 圖11 CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架實(shí)物圖 圖12 連接附件 02 硬件說(shuō)明 搭建液體吸光度測量系統,具體操作步驟如下: 1)使用***根光纖連接比色皿支架與光譜儀,另***根光纖連接比色皿支架與光源,注意兩端光纖呈 180°(如圖14 所示); 2) 通過(guò)USB 數據線(xiàn)連接光譜儀至PC 端; 3)用電源線(xiàn)連接光源和市電插座(注意選擇帶地線(xiàn)的***標電源線(xiàn)和市電插座); 4) 打開(kāi)光源,預熱***段時(shí)間后,在空比色皿中裝入純水,測量參考光譜; 5)切斷光路(此處不建議直接關(guān)閉光源,可通過(guò)遮擋光源來(lái)切斷光路),測量背景光譜; 6)恢復光路,將樣品裝入空比色皿,進(jìn)行樣品的吸光度測量。 圖13 裝有樣品的比色皿 圖 14 CUV-ALL-UV 4-WAY 比色皿支架 圖15 遮光罩 圖 16 液體吸光度測量系統實(shí)物圖 圖17 Flame 光譜儀接口說(shuō)明 注意:吸光度測量時(shí),遮光罩應始終放置在樣品上方,排除環(huán)境光的干擾。 03 軟件操作 本部分介紹吸光度測量的軟件操作流程,具體操作步驟如下: 1)從歡迎界面或者點(diǎn)擊圖標 2)出現“選擇濃度模型”窗口,點(diǎn)擊“僅吸光度”選項,其他兩項見(jiàn)文檔***后的補充介紹。 僅吸光度:測量液體或氣體樣品的吸光度。 朗伯比爾定律:適用于測量未知濃度的樣品,在吸光度測量的基礎上,輸入樣品的消光系數和光程,利用朗伯比爾定律 ???? = ????cl,得到樣品的濃度。 3)調整好硬件配置后,在軟件中設置數據采集參數,包括積分時(shí)間(integration time)、平均次數(average)和滑動(dòng)平均(boxcar)。用戶(hù)可根據光源的強度,調節積分時(shí)間和平均次數等參數,勾選 “暗噪聲校準”和“非線(xiàn)性校準”功能。注意參考 譜測量和樣品測量時(shí)的參數設置應相同。設置完成,光譜將顯示在右側譜圖界 面,點(diǎn)擊“下***步”按鈕。 積分時(shí)間:積分時(shí)間是檢測器在將累積的電荷通過(guò)A/D轉換器加工之前,被允許收集光子的時(shí)間長(cháng)度。***小積分時(shí)間是設備支持的***短積分時(shí)間,它取決于檢測器讀出所有像素信息的快慢,積分時(shí)間 與數據傳輸速度是不同的概念。 平均次數:光譜被顯示到軟件里之前會(huì )采集多次,然后取平均。 滑動(dòng)平均:平滑是***種可以應用于光譜的空間平均。該過(guò)程通過(guò)平均相鄰像素點(diǎn)的值來(lái)消除噪聲,因此它會(huì )以犧牲光學(xué)分辨率為代價(jià)來(lái)提高信噪比??臻g平均在光譜相對平坦以及相近像元變化較小的情 況下使用是非常有效的,但由此產(chǎn)生是分辨率的損失會(huì )使得尖銳的光譜特征峰難以分辨。當應用空間 平均時(shí),信噪比會(huì )以像元平均的平方根為基數進(jìn)行提高。請注意,在海洋光學(xué)軟件中,平滑寬度的值 是指所有像元以中間為基準靠左或靠右的像元和的平均數。平滑值是4實(shí)際上是將9個(gè)像元***起平均(4個(gè)靠左像元+1個(gè)中心像元+4個(gè)靠右像元),信噪比將以3為倍數增加。同樣的,平滑值是2(5個(gè) 像元)將使信噪比以2.2為倍數增加,平滑值是0(1個(gè)像元),信噪比以1為倍數增加(因此光譜不改 變)。 暗噪聲校準:海洋光學(xué)的大部分光譜儀都有自帶的遮光像元。暗噪聲校準會(huì )用當前光譜讀數減去遮光 像元的讀書(shū),以排除溫飄等系統性影響。 非線(xiàn)性校準:光譜儀出廠(chǎng)前已完成。如無(wú)特殊需求,請默認勾選。 觸發(fā)模式:請參考海洋網(wǎng)站的相關(guān)文檔。如無(wú)特殊需求,可保持默認設置不變。 4)出現“保存參考光譜”窗口,點(diǎn)擊圖標 5)出現“保存背景光譜”窗口,點(diǎn)擊圖標 6)在視圖窗口中,吸光度測量結果以?xún)蓮垐D譜的形式顯示。如下圖所示,左側為吸光度圖譜,右側為光譜全譜,圖譜結果均實(shí)時(shí)更新。點(diǎn)擊 創(chuàng )建新的光譜應用,在光譜應用向導中點(diǎn)擊吸光度向導圖標
。
保存參考光譜,再點(diǎn)擊“下***步”。
按鈕,保存背景光譜。之后點(diǎn)擊“完成”按鈕完成設置。
“以表格形式查看 結果”,即可查看圖譜的數據表,表中的數據可復制后粘貼到Excel 或 txt。
: 單步采集光譜數據,單次采集后停止,點(diǎn)擊運行,可繼續采集。
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