與典同行|2020中國藥典增補版應對方案——氨基酸篇
背景介紹 2023年10月，******藥品監督管理局發(fā)布了《中華人民共和***藥典》（2020年版）第***增補本，已于今年3月12日正式實(shí)施。其中收載新增品種47個(gè)，通用技術(shù)要求、指導原則6個(gè)；修訂或訂***種646個(gè)、通用技術(shù)要求15個(gè)，以期更快更好地滿(mǎn)足藥品生產(chǎn)檢驗、監督管理等工作的需要。 截圖來(lái)源:******藥品監督管理局網(wǎng)站
為更好地幫助客戶(hù)根據藥典新增通則和指導原則，開(kāi)展相關(guān)檢測方法擴項和升***，賽默飛針對藥典的新增內容，特推出2020中***藥典增補版應對方案專(zhuān)題。第***期我們聚焦增補本（四部）新增的“9120氨基酸分析指導原則”。
氨基酸作為構成人體所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)，通常紫外吸收較弱，直接使用紫外方法檢測干擾較大，靈敏度低。故藥典中將通過(guò)合適的衍生試劑經(jīng)衍生化增加生色團后，再使用液相色譜結合紫外檢測等手段作為藥品中氨基酸測定的常用方法。目前氨基酸衍生化主要分為柱前和柱后衍生，柱前衍生又有離線(xiàn)和在線(xiàn)衍生。藥典中常用的衍生化試劑主要有異硫氰酸苯酯（PITC）、氨基甲酸酯（AQC）、鄰苯二甲醛（OPA）、芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC）和2,4-二硝基氟苯（DNFB）等，不同的衍生化試劑在反應原理、效率及穩定性等方面不盡相同。***新公布的2020版中***藥典第***增補本（四部），新增的9120氨基酸分析指導原則，除了對分析方法進(jìn)行了***定優(yōu)化外，***受關(guān)注的當屬方法三——柱前OPA和FMOC衍生氨基酸測定法中***次提到了自動(dòng)化柱前衍生法。
自動(dòng)化在線(xiàn)衍生-紫外檢測法 Vanquish 液相色譜和自動(dòng)進(jìn)樣器 在線(xiàn)針內衍生程序示例 （Position R:A2：硼酸鹽緩沖液；Position R:A3：OPA溶液；Position R:A4：FMOC溶液；Position R:A5：進(jìn)樣稀釋液）（點(diǎn)擊查看大圖） 方法結合OPA和FMOC衍生試劑，Acclaim 120 C18色譜柱（PN: 059148）和Vanquish自動(dòng)進(jìn)樣器在線(xiàn)針內衍生功能，可以輕松實(shí)現氨基酸的在線(xiàn)自動(dòng)化衍生、分析。無(wú)需手動(dòng)衍生，節省了試劑消耗和人力成本，同時(shí)在線(xiàn)衍生程序編輯智能、簡(jiǎn)便，大幅提升了氨基酸檢測效率。 自動(dòng)在線(xiàn)衍生-紫外檢測法分析氨基酸 （點(diǎn)擊查看大圖） 另外，指導原則方法三中提到******和二***氨基酸衍生物“經(jīng)反相高效液相色譜分離后需用紫外光檢測器在338nm和262nm波長(cháng)處分別檢測”?；陔p波長(cháng)檢測要求，客戶(hù)通常會(huì )選擇二極管陣列檢測器，或單通道紫外檢測器結合波長(cháng)切換等方法，而賽默飛Vanquish Core 紫外檢測器標配雙檢測通道特點(diǎn)，無(wú)需波長(cháng)切換即可實(shí)現兩個(gè)波長(cháng)的同時(shí)檢測，結果優(yōu)于相關(guān)標準常規高效液相色譜方法的檢測靈敏度。
非衍生-電霧式檢測法 賽默飛電霧式檢測器（Charged Aerosol Detector，CAD）作為通用型檢測領(lǐng)域的典型代表，憑借其在靈敏度、重現性以及響應***致性等方面的顯著(zhù)優(yōu)勢而備受用戶(hù)關(guān)注和青睞，成為***內外各大藥企和科研院所在研發(fā)和質(zhì)量控制等應用方面的***大利器。而基于大部分氨基酸紫外吸收較弱的特點(diǎn)，CAD又為氨基酸檢測，開(kāi)辟了***條衍生方法以外的獨特檢測捷徑。 Vanquish 電霧式檢測器（CAD） CAD檢測器結合賽默飛Hypercarb多孔石墨化碳色譜柱（PN:35005-154630）在極性化合物分析方面的獨特優(yōu)勢，可以實(shí)現無(wú)需衍生的氨基酸直接分析，大大簡(jiǎn)化了前處理步驟，也完美規避了指導原則中提及的關(guān)于“二***氨基酸衍生重復性較差，OPA-氨基酸衍生物不穩定”等實(shí)際問(wèn)題。兩種方法在重現性和靈敏度方面的表現基本相當。 非衍生-電霧式檢測法直接分析氨基酸 總 結
賽默飛Vanquish液相色譜平臺，所具備的多種類(lèi)型的檢測器和靈活可定制的程序軟件，結合兼具合規和創(chuàng )新的分析色譜柱，既可以滿(mǎn)足自動(dòng)化在線(xiàn)氨基酸衍生分析要求，又能拓展無(wú)需衍生的CAD直接分析氨基酸方法。在滿(mǎn)足藥典第***增補本（四部）中的新增指導原則的同時(shí)，為相關(guān)制藥及食品等行業(yè)客戶(hù)在氨基酸檢測方面提供了更多更新穎的檢測思路和分析手段。 參考文獻： [1] ******藥典委員會(huì ). 中華人民共和***藥典（2020版第***增補本）[S]. 北京: 中***醫藥科技出版社, 2023: 623. [2] Pual H. Gamache等. 電霧式檢測在液相色譜及相關(guān)分離中的應用[M].第1版. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2024. [3] AN_20056_HPLC_藥物_全新Vanquish Core高效液相色譜系統用于氨基酸分析——在線(xiàn)衍生紫外檢測和非衍生電霧式檢測方法比較 [4] 陸明, 孫黛妮, 汪楊等. OPA-FMOC聯(lián)用柱前衍生化法測定復方氨基酸注射液中氨基酸的含量[J].藥物分析雜志, 2010, 30(12): 2323-2327
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