單克隆抗體第-***次篩選是制備過(guò)程中的關(guān)鍵步驟，涉及抗原特異性、抗體分泌量和細胞生長(cháng)特性等多方面評估。通過(guò)精細操作和科學(xué)流程，確保篩選出特性?xún)?yōu)良的雜交瘤細胞株，為后續研究與應用奠定堅實(shí)基礎。下面***起來(lái)看下單克隆抗體第-***次篩選的方法：

第-***次篩選

***先，在已免疫過(guò)的B淋巴細胞（即效應B細胞）和骨-髓瘤細胞進(jìn)行雜交時(shí)，可能出現的情況應該先弄清楚。

如果只考慮兩兩融合，可能的情況有：（效應）B淋巴細胞和（效應）B淋巴細胞的融合；（效應）B淋巴細胞和骨-髓瘤細胞的融合（即雜交瘤細胞）；骨-髓瘤細胞和骨-髓瘤細胞的融合（即瘤瘤細胞）。

第-***類(lèi)細胞在體外培養的條件下，因為無(wú)法無(wú)限增殖，***-終死亡，因此，篩選的關(guān)鍵是限制第二類(lèi)細胞的增殖?？茖W(xué)***在設計實(shí)驗時(shí)，已經(jīng)考慮到這方面問(wèn)題，所以他們選擇的瘤細胞是有遺傳缺陷的，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷（TK－）或者次黃嘌呤磷酸核苷轉移酶（HGPRT－）缺陷。

篩選的目的：獲得雜交瘤細胞。

篩選的方法： 用選擇性培養基來(lái)完成，即HAT培養基。

加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的培養基稱(chēng)HAT培養基。

其中，氨基喋呤可阻斷DNA合成的主要途徑。主要途徑阻斷后，依靠應急途徑即在HGPRT（次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉移酶）和TK（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黃嘌呤合成DNA，缺少其中***種，DNA合成不能發(fā)生。

用于雜交的骨-髓瘤細胞系均由經(jīng)有毒-藥物誘導而成選擇產(chǎn)生的代謝缺陷型細胞，細胞內均無(wú)TK或HGPRT，所以單個(gè)或融合骨-髓瘤細胞在HAT培養液中將死亡。B細胞雖然有HGPRT和TK，但在體外通常培養條件下，尤其是在單個(gè)細胞環(huán)境下難于長(cháng)期存活和增殖傳代。

因此，只有雜交瘤細胞才能在HAT培養液中生長(cháng)繁殖。

即:

①淋巴細胞：不能生長(cháng)，5到7天死亡；DNA的主要合成途徑被A阻斷。

②骨-髓瘤細胞：不能生長(cháng)，5到7天死亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途經(jīng)受阻。

③骨-髓瘤細胞和脾細胞融合形成雜交瘤細胞，可長(cháng)期生長(cháng)繁殖。利用淋巴細胞的HGRT將H合成為嘌呤堿并***-終與T***起合成DNA從淋巴細胞獲得產(chǎn)生某種抗體的遺傳信息，從骨-髓瘤細胞獲得不斷繁殖的能力。

由于通過(guò)以上方法選擇出雜交瘤細胞，雖然都是雜交瘤細胞，但可能是同***抗原的不同抗原決定簇刺激產(chǎn)生的。所以產(chǎn)生抗體是不純的。如果不進(jìn)***步提純，這樣得到的是多克隆抗體，所以，需要第二次篩選。

(文章來(lái)源于儀器網(wǎng))