染色多孔板，怎么拍才好看？
病毒噬斑實(shí)驗 (Plaque assay) 指的是用待測病毒感染宿主細胞后，在固體介質(zhì)的限制下，從***初感染的細胞中釋放的病毒只能向宿主細胞周邊擴展，經(jīng)過(guò)***段時(shí)間的增殖，感染病變細胞聚集的區域會(huì )形成空斑，即病毒噬斑。不同的生長(cháng)條件，不同種類(lèi)的病毒，其噬斑形態(tài)也有顯著(zhù)差異。因此噬斑大小、分布，邊緣情況都可以提供有關(guān)病毒生長(cháng)和毒力因素的有價(jià)值的信息。
其基本步驟為：
1
培養宿主細胞：在多孔板中培養宿主細胞，達到匯合度90%以上；
2
配制固體介質(zhì)/固體覆蓋層：固體介質(zhì)的配方多種多樣，常見(jiàn)配方包括，0.6%瓊脂糖，2%羧甲基纖維素 (CMC) 或2.4%膠體微晶纖維素 (avicel) 的水溶液，固體介質(zhì)使用前需高壓滅菌；
3
病毒感染：將不同稀釋倍數的病毒感染液與宿主細胞進(jìn)行共培養，***段時(shí)間后棄去病毒感染液，加入固體介質(zhì)繼續培養；
4
固定，染色：先向孔板中加入10%甲醛溶液，固定后棄去甲醛溶液，再加入0.5%結晶紫染液染色，待染液充分滲透后，用清水洗去浮色；
5
拍照并分析：用成像設備對多孔板進(jìn)行成像，對每孔的噬斑數進(jìn)行計算，對相同稀釋倍數的復孔取平均值以計算病毒滴度，計算公式為：噬斑形成單位 (PFU/mL) =平均噬斑數/（病毒感染液稀釋倍數×病毒感染液體積 (mL) ）。
***先，從機器里拿出我們平時(shí)拍WB的黑色樣品盤(pán)和白色墊板，拍多孔板要用的是底部透明的這款透明樣品盤(pán)。將多孔板放置在樣品盤(pán)中間，將透明樣品盤(pán)推入IQ800的下層樣品倉，選擇Colorimetric模式中的OD measurement，點(diǎn)擊start進(jìn)行拍攝就好啦。
圖1：從左到右依次為透明樣品盤(pán)、NP透鏡、NP透鏡導軌
(文章來(lái)源于儀器網(wǎng))
