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不同PCR儀的區別及運用

儀器網(wǎng)小編2020-11-20 16:04:51

PCR儀

簡(jiǎn)單的說(shuō),PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內In Vitro的大量合成,基本上它是利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈,進(jìn)而達到基因復制的目的。

***個(gè)基本的PCR須具備:

①要被復制的DNA模板 Template

②界定復制范圍兩端的引物Primers

③DNA聚合酶Taq. Polymearse

④合成的原料(四種脫氧核苷酸)及水

目前常用的技術(shù),可以將***段基因復制為原來(lái)的***百億至***千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類(lèi)。

把***次PCR擴增只能運行***個(gè)特定退火溫度的PCR儀,叫傳統的PCR儀,也叫普通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運行。主要是做簡(jiǎn)單的,對目的基因退火溫度的擴增。該儀器主要應用于科研研究,教學(xué),醫學(xué)臨床,檢驗檢疫等機構。

***次性PCR擴增可以設置***系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度,這樣的儀器叫梯度PCR儀。因為被擴增的不同DNA片段,其***適退火溫度是不同的,通過(guò)設置***系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴增,從而***次性PCR擴增,就可以篩選出表達量高的***適退火溫度,進(jìn)行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣節約成本的同時(shí)也節約了時(shí)間。

原位PCR儀用于從細胞內靶DNA的定位分析的細胞內基因擴增儀,如病源基因在細胞的位置或目的基因在細胞內的作用位置等。是保持細胞或組織的完整性,使PCR反應體系滲透到組織和細胞中,在細胞的靶DNA所在的位置上進(jìn)行基因擴增,不但可以檢測到靶DNA,又能標出靶序列在細胞內的位置,于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過(guò)程及病理的轉變有重大的實(shí)用價(jià)值。

在普通PCR儀的基礎上增加***個(gè)熒光信號采集系統和計算機分析處理系統,就成了熒光定量PCR儀。熒光定量PCR儀有單通道,雙通道,和多通道。當只用***種熒光探針標記的時(shí)候,選用單通道,有多熒光標記的時(shí)候用多通道。該儀器主要用于醫學(xué)臨床檢測,生物醫藥研發(fā),食品行業(yè),科研院校等機構。


(來(lái)源: 儀器網(wǎng)小編)