前言

雪卡毒素(也稱(chēng)西加毒素)中毒是由雪卡毒素（CTXs）引起的，是世界上常見(jiàn)的食物中毒來(lái)源之***，據調查，CTXs每年大約造成5萬(wàn)人中毒，是造成人類(lèi)中毒分布***廣、人數***多的***種海洋毒素之***。目前發(fā)現CTX的類(lèi)似物有30余個(gè)。

雪卡毒素是***種由底棲甲藻產(chǎn)生的熱穩定脂溶性聚醚毒素，在天然樣品中以微量存在，當濃度達到0.2μg/ kg時(shí)具有神經(jīng)毒性作用，CTXs的半數致死量（median lethal dose，LD 50）為0.45 μg/kg，比河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）的毒性還要強100倍，是重要的神經(jīng)毒素。美*** FDA 和 EFSA 建議控制水平為 0.01 μg CTX1B 當量/kg。

根據島津新發(fā)布的***項技術(shù)，通過(guò)向流動(dòng)相中添加非常少量的堿金屬（如Na+和Li+）來(lái)優(yōu)化***種使用鈉和鋰加合物[M+Na]+和[M+Li]+離子檢測CTXs的高靈敏度方法。通過(guò)這項技術(shù)，可以使用LCMSMS成功分離及檢測FDA推薦的低濃度的CTXs。本文介紹了[M+Li]+新方法的分析條件和準確度。

CTXs標準品

? 1、5種CTX類(lèi)似物的標準品由JFRL（日本食品分析中心）提供

? 2、9種CTX類(lèi)似物的混標樣品由NIHS（日本***立醫藥品食品衛生研究所）提供

分析條件

儀器型號Nexera X3 UHPLC+LCMS-8060NX

分析結果

1、[M+Na]+或[M+Li]+離子的形成和碰撞能（CE）的優(yōu)化

在流動(dòng)相中添加Na+或Li+會(huì )通過(guò)陽(yáng)離子化增加鈉或鋰加合物的形成。為了獲得所需的離子[M+Na]+或[M+Li]+ ，可在流動(dòng)相中加入微量堿金屬。下圖為不同流動(dòng)相條件下CTX1B的分析示例，本研究中分析的其他目標化合物也獲得了相同的結果。當向流動(dòng)相中添加Li+時(shí)，未檢測到 [M+Na]+。這些結果表明，可以通過(guò)使用[M+Li]+等替代離子來(lái)實(shí)現更高的靈敏度。

考察不同流動(dòng)相條件下CTX1B的分析結果（SIM）

但是，[M+Na]+和[M+Li]+母離子沒(méi)有提供任何有用的產(chǎn)物離子，因此優(yōu)化CE用以監測[M+Na]+>[M+Na]+或[M+Li]+>[M+Li]+在MRM分析模式下提供***高的信噪比。CTX1B的優(yōu)化CE如下表所示。其余8種類(lèi)似物的***佳CE以類(lèi)似的方式進(jìn)行了優(yōu)化。

CE與峰面積或信噪比之間的關(guān)系

2、改善色譜峰分離度和靈敏度

在下圖中，比較了使用文獻方法、添加Na的流動(dòng)相（b）和添加Li的流動(dòng)相（c）對目標化合物的分離。2,3-dihydroxyCTX3C和51-hydroxyCTX3、49-epi-CTX3C和CTX3C、CTX4A和CTX4B在新條件下表現出明顯更好的分離。除2,3-dihydroxyCTX3C和51-hydroxyCTX3外的6種類(lèi)似物和CTX3C在加Na流動(dòng)相中具有良好的靈敏度。實(shí)驗證實(shí)，使用添加Li的流動(dòng)相時(shí)，9 種CTX類(lèi)似物的靈敏度相當。

9 種CTX類(lèi)似物的MRM色譜圖（1 ng/mL NIHS混標樣品）

3、定量限（LOQ）的評估

使用JFRL標準品生成校準曲線(xiàn)，以確認[M+Li]+> [M+Li]+ 。校準曲線(xiàn)***低點(diǎn)的每個(gè)色譜圖如下圖所示。確定校準曲線(xiàn)的范圍，使每個(gè)校準點(diǎn)的3次重復分析的平均準確度為100±5%，并指定***低點(diǎn)作為 LOQ。用5 g魚(yú)肉制備1 mL測定溶液時(shí)，5種標準品的LOQ范圍為0.0004至0.0012μg/kg。

校準曲線(xiàn)***低點(diǎn)的MRM色譜圖

小結

島津***新的技術(shù)介紹了***種通過(guò)向流動(dòng)相添加微量堿金屬（如Na+和Li+）來(lái)提高CTX檢測靈敏度的方法。這項工作成功證明了使用LC/MS/MS在低濃度下分離和檢測CTX類(lèi)似物，符合FDA限度要求。

（文章來(lái)源于互聯(lián)網(wǎng)）