熒光分光光度計測試需要的幾大步驟：

　　(***)樣品準備

　　1.液體樣品根據用戶(hù)提供的技術(shù)指標，檢查濃度范圍是否合適，如果需要稀釋?zhuān)瑒t要考慮所需溶劑類(lèi)型和稀釋倍數。

　　2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品，均可直接測定。

　　(二)操作步驟

　　1.開(kāi)機：接通電源，打開(kāi)主機開(kāi)關(guān)，點(diǎn)燃(打開(kāi))光源后，根據說(shuō)明書(shū)要求啟動(dòng)計算機。

　　2.檢測前準備：參照儀器說(shuō)明書(shū)，在20天內至少進(jìn)行***次激發(fā)校準和發(fā)射校準，檢測前儀器應預熱。

　　3.工作條件的選擇：環(huán)境溫度應在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩定，無(wú)磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾。根據樣品的特性及熒光強度，選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應時(shí)間等)。

　　4.基本測定

　　(1)熒光激發(fā)光譜測定

　　設置儀器參數，掃描發(fā)射波長(cháng)，找到maxλem，以此為發(fā)射波長(cháng)，記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長(cháng)的函數，便得到激發(fā)光譜。

　　(2)熒光發(fā)射光譜測定

　　設置儀器參數，掃描激發(fā)波長(cháng)，找到maxλex，以此為激發(fā)波長(cháng)，記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長(cháng)間的函數關(guān)系，便得到熒光發(fā)射光譜。

　　(3)差譜測定

　　設置熒光分光光度計參數，選擇合適的工作方式，測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來(lái)，在***定的工作方式下，掃描樣品溶液的發(fā)射波長(cháng)，得到當時(shí)的光度值和儲存的背景值之間的差示值，即差譜。

　　(4)峰面積積分

　　選擇適當的工作方式，對樣品溶液進(jìn)行積分操作，即得到峰面積積分。

　　(5)熒光強度

　　選擇合適的測量參數，設置λex、λem，采用定點(diǎn)讀數或掃描方式，即可測得所選波長(cháng)處的熒光強度。

　　(6)定量測定

　　配制***系列已知濃度的標準溶液，在***定的測定條件下，設置λex、λem，按照由稀至濃的次序，測定標準溶液的熒光強度，繪制熒光強度—濃度的工作曲線(xiàn)，不改變儀器參數測定未知溶液的熒光強度，由工作曲線(xiàn)即可求出未知溶液的濃度。

　　(三)分析結果的表述

　　1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。

　　2.峰面積積分、熒光強度由儀器控制電腦計算顯示。

　　3.定量測試：在相同的測定條件下，測定***系列已知濃度的標準溶液的熒光強度，繪制出熒光強度-濃度的工作曲線(xiàn)。濃度未知的溶液的熒光強度測定后，由工作曲線(xiàn)求出該溶液的濃度

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